实验材料：

基础培养基（液体或干粉）                PET/PETG方形试剂瓶[NEST]

血清（常规为FBS/NBS）                   补充剂

移液枪                                              电动移液枪

15mL、50mL无菌离心管[NEST]        灭菌超纯水                     

盒装无菌吸头[NEST]                          血清移液管[NEST]

超净工作台                                        双抗（青链霉素混合液）

杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]       针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]    

实验准备：

血清准备：

配置培【péi】养基前【qián】一天，将所需血清从-20℃冰库取出，放置入4-26℃冰箱缓慢解冻储存，使用前37℃水浴加热。

培养基准备：

液体基础培养基使用前37℃水浴加热。

实验流程：

基础培养基配置（干粉）：

根据配置体积，选择合适的灭菌后容器，在容器中倒入约90%体【tǐ】积的【de】超纯水，将培养基干粉全部倒入该容器中，用少量超纯水将袋内残留粉末洗出。

搅【jiǎo】拌30min使所有成分完全溶解，待溶液澄清后【hòu】，根据说明书加入适当量的碳酸氢钠（分析纯），继续搅拌5-10min至溶解，随后超纯水定容并调节PH值。(过滤【lǜ】会使培养基PH值稍微偏高，所以用1mol/L氢【qīng】氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调整PH值至7.4-26.30）

使用0.22μm杯式【shì】滤器[NEST]或0.22μm针式滤器[NEST]过滤除菌，并按照【zhào】日常使用规格分装入PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中，4-26℃条件下避光保存备用。【菌检合格后方可使用】

培养基配置：

若含有补充【chōng】剂，用1000μL无菌吸头[NEST]取出适量预热完成的基础培养基，注入补充剂西林瓶中，将其充分溶解，再将含有【yǒu】补充剂的培养基转移入基础【chǔ】培养基中。

接着按照血清使用比例，用血清移液管[NEST]吸取适量预热完成的血清，注入【rù】基础培养基中【zhōng】，盖上瓶盖充分混匀。

双抗加入：

除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不添加任何抗生素。若为防止细菌、真菌污染，或【huò】怀疑细胞污染需要清除细菌，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml，链【liàn】霉素为100ug/ml。

培养基保存：

将【jiāng】配置后的完全培养基4-26℃条件下，避光保存备用；或按照使用需求分装入对应规格的PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中。隔夜或4-26天后监视完【wán】全培养基，溶液澄清通透且无染菌，方可使用。

使用多余的血清，按照剩余量，可分装入15mL/50mL的无菌离心管[NEST]中（防止【zhǐ】血清冻存后膨胀泄露疑问，离心管工【gōng】作体积建议为80%），亦可分装入合适规格的PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中，并用封【fēng】口膜封口，-20℃条件下避光保存。

使用到的NEST产品：

15mL、50mL无菌离心管[NEST]           PET/PETG方形试剂瓶[NEST]

盒装无菌吸头[NEST]                            血清移液管[NEST]

杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]          针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]