实验材料：

基础培养基                          

血清（常规为FBS/NBS）

电动移液枪 

移液管[NEST]

无冰冰盒[NEST]

T25培养瓶[NEST]

自动旋盖机[NEST]

盒装无菌吸头[NEST]

100mm细胞培养皿[NEST]

15mL、50mL无菌离心管[NEST]

不能忘记的准备：

1.记得一定要预约【yuē】干冰！！！不然你细胞取出来可没地方待了，要是液氮罐距离实验室远点，你的细【xì】胞可能就没了。

2.用来转移细胞【bāo】的【de】无冰冰盒一定要灭菌！！！当然，如果条件刻苦点的泡沫盒，也不要偷懒，无论什么装载容器，都要【yào】提前灭菌，可以有效规避污染风险。

3.水浴锅提前预热至37℃。

4.培养基预热至37℃。

要开始了！（敲黑板）：

1.在生物样本库中搜寻到目标细胞,在液氮罐找到对应的细胞，放入预【yù】先准【zhǔn】备好的无冰冰盒（容器）内。冰盒内装有碎干冰，冰芯的铝合金外壳【ké】协同高导热的合金模块，确保样品能快速冷却，孔之间的温度调节差异小于0.1℃，能很好的维持样品间的温度调节一致性。

2.在细胞进入水浴锅解冻前，务必将冻存管竖直立在桌面上10~20s，这样之后，可能排空存在在冻存【cún】管盖缝隙内的液【yè】氮。尤其是外旋盖的冻存管，特别要注意！不然在水浴【yù】解冻的时候有概率会砰的一声爆发出来！极为风险。

3.将冻存管在37℃水浴锅内水浴解冻，因为DMSO在常温状况下对细胞有毒副作用，若解冻时间段过长，会导致细【xì】胞损伤并作用其存活率，所以一【yī】定要快，解冻过程在1~2min内完成。

4.解冻完成后，在生物安全性柜内【nèi】，用自动旋盖机打开冻存管，之后在移液枪将冻【dòng】存管内细胞复悬，然后将细胞悬液转移至含有5~10ml培养基的离心管中，1000rmp离心5min（根据各自细胞的特新调整离心力和离心时【shí】间段）。如果没有培养基稀释【shì】，在离心过程中较高浓度的DMSO会对细胞损伤，作用活存活率！

5.丢弃上清，里面还有DMSO和死去细胞的裂解产物，这不是我们所需【xū】要的。将剩【shèng】余的细胞用培养基稀释复悬，稀释比例为1:10~1:15，再按照大家各自实验需求，分装到100mm培养皿或者T25瓶中，显微镜监视细胞状态，然后转移至细胞培养箱中培养。

复苏后的注意点：

复苏后记得每天都要监视细胞状态，及时更换培养基【jī】，确保细胞所需营养的充足和生长环【huán】境的清洁。

使用到的NEST产品：

移液管[NEST]

无冰冰盒[NEST]

T25培养瓶[NEST]

自动旋盖机[NEST]

盒装无菌吸头[NEST]

100mm细胞培养皿[NEST]

15mL、50mL无菌离心管[NEST]