细胞培养【yǎng】过程中时常会出现这样或那样的疑问,别小看细胞培养,里面却蕴含着大学问.通过与【yǔ】使用者沟通你会发现了很多可【kě】以避免的疑问发生,下面对细胞培养过程中存在的几大误区做详细解析。
误区一
XX实验室培养XX细胞用的就是这个培养基，我用一样的就可以
?选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：
首选：建立该细胞株所用的培养基
参考：文献
尝试：实验室常用的培养基
按需：根据细胞株的特点、实验的需要来选择
最客观：用多种培养基培养，根据实际效果选择，但较繁琐
误区二
长期使用抗生素，以对抗污染
? 细胞培养时不应常规使用抗生素
? 连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生，导致【zhì】轻度污染持续存在，一旦将抗生素从培养基中去除，这种【zhǒng】轻度污染最终将发展成大规模污染
? 连续使用抗生素会掩盖支原体感染及其他隐性污染
? 有些抗生素会与细胞发生交叉反应，干扰您研究的细胞过程
误区三
培养基中的谷氨酰胺容易降解，需要不断补充
如果正确使用，一般不需要补加
? 4℃避光保存
? 分装，不要反复预热
? 含有谷氨酰胺的培养基，开封后应尽快用完
误区四
培养基误存于-20℃,溶解后继续使用
? 在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基再次融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致【zhì】培养【yǎng】基营养成分【fèn】和渗透压改变，培养细胞时，容易细胞破裂而死亡
? 建议丢弃该培养基,重新购买新的培养基用于细胞培养
误区五
常见细胞系无需检测血清批次，可以直接切换
? 血清来源于动物，组成成分有1000种左右，每个批号的组分和组分含量都是不确定的，批间差异【yì】是可【kě】能存在的
? 如果某一个批次血清使用效果较好，记住批号，订货的时候给予说明
? 如果需要换不同批号的血清，提前查询COA文件，寻找测试结果接近的批次
? 先订购一瓶试用，试用成功之后再大量订购该批号血清
误区六
血清灭活以后使用效果更好
? 血热灭活的血清对大多数细胞而言是不需要的，高温处理方式可能作用【yòng】了血清的品质，造成细胞生长速率的降低，经过热处【chù】理方式的血【xuè】清，沉淀物增多
? 灭活补体系统
补体【tǐ】参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板【bǎn】释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞，刺激平滑肌收缩等
? 在免疫【yì】学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭【miè】活血清
血清必须热灭活？
热灭活是指将血清于56℃处理方式30分钟，灭活血清中的补体。
实验表明，经热灭活的血清对细胞生长【zhǎng】可能仅有微小促进或完全没有任何作用，甚至通常因高温处理方式而损失掉血清中部分营养成分，从【cóng】而作用血清质量，造成细胞生长速率降低。热灭活过程中因局部温度调节过高、摇晃不均匀或灭活时间段过长，都会造成血清品质下降。且经热灭活后的血清会增加发生蛋白沉淀概率，这些沉淀物在【zài】倒置显微镜下监视像是“小黑点”，通常会让研究者误以为是血清遭受【shòu】污染。
因此，若非必须血清不需要做热灭活，而少数对补体敏感的细胞实验【yàn】，如某些免疫学实验或腺病毒包装等，可酌情对血清进行热灭活操作。
热灭活方法示例：
1.热灭活前须先摇匀解冻后的血清并恢复至室温；
2.取部分摇匀血清置于50ml离心管中，并准备同规格对照管一个；
3.对照管内加入血清等体积水；
4.对【duì】照管内插入温度调节计进行温度调节预试，当温度调节达到56℃时将恢复至室温的血清放入水浴锅30min；
5.灭活过程中需要每隔5min轻轻晃动摇匀，以保证温度调节均一。
误区七
原代细胞的培养及操作与传代细胞一样
? 与细胞系不同，原代细【xì】胞具有有限的扩增能力。我【wǒ】们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。
? 当细胞传代时，使用低浓度的【de】胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中【zhōng】的胰酶【méi】，因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。
? 通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以【yǐ】促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。
? 原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于【yú】37℃水浴中，维持并轻轻旋【xuán】转直到内容物刚刚解冻是很重要【yào】的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操【cāo】作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。
? 我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞【bāo】后的第二天更换培养基以去除任何残留【liú】的DMSO。
